本文标题："光谱成像与荧光蛋白 "

光谱成像与荧光蛋白

荧光蛋白FRET对所构造与青色和黄色荧光蛋白（ECFP和EYFP）的变种，光谱成像需要使用激光谱线青色变种的激发与荧光蛋白吸收曲线重叠。

现代共聚焦显微镜功能的二极管和气体激光器具有在405、440和458纳米的光谱线，所有这些是有用的青色荧光蛋白的激发。然而，在458纳米的光谱线从氩离子气体激光器的查询结果，明显的受体泄放通过（约20％）的荧光共振能量转移通道为ECFP-EYFP对。

与此相反，在405和440纳米二极管激光器会产生渗出通过分别约为4％和8％，但仍必须除去污染信号从直接受体激发准确地计算出FRET信号后的供体的比率（I D ）的受体（ I DA）的存在和不存在的图象强度的已被确定，FRET效率可以通过应用下列关系式确定：共振 = 1 - （I DA / I e）。

以这种方式计算FRET效率，使用荧光蛋白已被证实与短肽接头，以及更为困难的任务是研究FRET单独表达的探针之间的熔合在一起FRET对。产生的结果非常相似的荧光共振能量转移效率值时强度为基础的和FLIM方法的成像光谱进行了比较。

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