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 南方转渍反应 ( Southern blotting )

 
1.    将胶体浸泡于100 ml 0.25 M HCl中15分钟。(若DNA 片段小于4 Kb,此步骤可省略)
2.    将胶体浸泡于100 ml 0.4 M NaOH中30分钟。
3.    滤纸与尼龙膜先以50 ml 0.4 M NaOH润湿。
4.    塑胶盒内装入适量250 ml 0.4 M NaOH作为转移缓衝液,再根据下图所示,依序逐一在塑胶盒上堆叠电泳胶片、尼龙膜、滤纸、吸水纸及玻璃板,以便以毛细管转移方法将DNA 转渍至尼龙膜上。
【注意! 滤纸、尼龙膜及胶片间可能会有气泡存在,可利用试管平移方式赶走气泡!】
5.    转渍过程可持续2-24小时,转渍后将尼龙膜利用50 ml 2 X SSC rinse,再将其放置于吸水纸上并于80℃定温箱中30分钟,固定DNA。
 
  0.25 M HCl : 2 ml + 98 ml H2O (100 ml )
  0.4 M NaOH: 12 ml + 288 ml H2O (300 ml )
  2 X SSC    : 5 ml SSC + 45 ml H2O (50 ml )
 

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