一、绪言

追踪各试验生物细胞内基因体DNA(genomic DNA)内片段基因序列所在位置时，常需先借由南方转渍(印)法；将限制脢所切割的基因体DNA片段，由软质的洋菜胶片(agarose)电泳分离，转移至硬性支撑物质(solid support)后，再进行标的的基因物的标定,然后将所得结果进行最后分析。因此南方转渍(印)法是分析生物细胞内片段基因序列特性或相对位置所不可缺的过程之一。常用的硬性支撑物质有硝化纤维滤纸(nitrocellulose filter)或耐(尼)龙膜(nylon membrane)，而转移的方法有毛细透析转移法(capillary elution)、电泳转移(electrophoretic transfer)、和真空转移(vacuum transfer)。后两者因为需要使用较商业化制作的设备,而毛细透析转移法，虽然时效上不及后两者,但因在器材準备上较为方便、简单、便宜。因此下述过程是介绍用毛细透析转移法，将DNA片段转移至硝化纤维纸。

 

二、试剂及器具

1.浅底玻璃盘

2.Whatman 3MM滤纸

3.吸水纸

4.玻璃片

5.硝化纤维滤纸(nitrocellulose filter)

6.长玻璃试管

7.保鲜膜

8.平头镊子

9.去离子水(deionized water)

10.蒸馏水

11.刀片

12.变性溶液:1.5M NaCl和0.5N NaOH

13.中和溶液(neutralization water)：1M Tris(pH 7.4), 1.5M NaCl

14.10X SSC转渍(印)液:溶87.6克NaCl和44.1克sodium citrate在800ml的蒸馏水内,并用几滴10N的NaOH把pH值调成7.0,再用蒸馏水调至1000ml。

15.10X SSPE转渍(印)液：溶87.6克NaCl、13.8克NaH2PO4．H2O和3.7克EDTA在800ml的蒸馏水内，并用10N的NaOH把pH值调成7.4，再用蒸馏水调至100ml。

16.0.2N HCl

17.0.5μg/ml溴化乙锭(ethidium bromide)

 

三、仪器和设备

1.紫外光检视器(UV transilluminator)

2.旋转盘(rotary platform)

3.保护面罩

 

四、步骤

藉由洋菜胶电泳分离之DNA胶片,立即以毛细透析转移法,将胶片上分离之DNA转移至硝化纤维纸上。

转渍(印)前:

1.先将取下的电泳胶片放置于浅底玻璃盘上，以刀片切除不必要的部份。

2.在洋菜电泳胶片载入DNA之带孔位置边处之两角中之一角剪去一小角,作为承载DNA样本顺序的记号。去除所有剪下洋菜之小胶片。

3.倒入100~200ml的变性溶液，在旋转盘上轻轻持续转动40~60分钟，以使胶片内DNA能变性以利转渍(印)。

4.倒出变性溶液，并用去离子水稍作润湿。

5.再用两倍量的中和溶液浸泡约30分钟，其间持续轻轻转动玻璃盘，如此步骤重複一次。

 

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