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本文标题:"转渍(印)步骤主要有?"

 转渍(印)步骤:

1.把玻璃片架于浅底玻璃盘上。
2.剪一长条Whatman 3MM滤纸,长度要足够使滤纸平铺在玻璃片后,滤纸两端伸展至浅底玻璃盘底而有残留弯曲为宜,宽度要稍大于胶片。
3.倒入10X SSC或10X SSPE转渍(印)液,约使浅底玻璃盘有三分之二底深的量以上。
4.将剪下之滤纸放入转渍(印)液内,待全部滤纸润湿之后小心展开平铺在玻璃片上,滤纸两端伸展至浅底玻璃盘底,使完全浸入浅底玻璃盘内的转渍(印)液内。平铺在玻璃片上的滤纸需和玻璃片完全平整紧密接触,如中间有气泡产生,可用长玻璃吸管抚平以去除气泡。然后再以玻璃吸管吸取转渍(印)液滴入抚平之纸面上。
5.再剪两张和洋菜胶片稍大之滤纸,其中一张同上述步骤4平铺在其上。
6.将电泳胶片反向置于滤纸上。
7.然后剪一张比电泳胶片稍大之硝化纤维纸,先将此一硝化纤维纸完全泡在上述浅底玻璃盘内转渍(印)液内数分钟(切勿折叠),待纸张完全浸湿吸水后,光滑面对胶片再拂平铺在其上,各角落对齐后,同样如电泳胶片载入DNA之带孔位置边处剪去一小角,也在相对应的硝化纤维纸上剪去一小角为记号。同样用长玻璃吸管抚平以去除气泡。再吸取转渍(印)液滴在纸上。
8.将步骤5剩馀之一张滤纸覆盖在硝化纤维纸上,再以长玻璃管抚平。
9.以保鲜膜沿覆盖的滤纸边缘及浅底玻璃盘底封好玻璃盘。
10.然后逐步以吸水纸加盖其上,约15~20公分厚,小心整平吸水纸后再盖上一块玻璃片,最后在玻璃片上置放约300~500公克重书本或重物,以利于转渍(印)液从电泳洋菜胶片上转渍(印)DNA至硝化纤维纸上。
11.全部转渍(印)过程安置妥当之后,将转渍(印)设施留置隔夜或8~24小时。
12.逐步移除加盖其上的书本(重物)、玻璃纸、吸水纸、覆盖在电泳洋菜胶片上之滤纸,然后把转渍(印)DNA的硝化纤维纸用镊子小心夹至另一盛有6X SSC的浅底玻璃盘,轻轻摇晃冲洗液冲洗掉附着在硝化纤维纸上的碎洋菜胶。
13.约10分钟后,再用镊子小心夹至铺有吸水纸的实验桌上。平放好,待硝化纤维纸上的水滴消失,纸张稍乾后进行DNA固定。
﹡如果想知道洋菜胶片上的DNA是否转渍(印)到硝化纤维纸上,可将洋菜胶片放入有0.5μg/ml溴化乙锭水溶液内,染色20~30分钟。然后再小心将洋菜胶片放在紫外光下检视是否有DNA片段存在。

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